LDH-細胞毒性檢測Wako

LDH-細胞毒性檢測Wako

LDH-Cytotoxic Test Wako

◆背景

　　在日本每年在動物實驗中死亡的小鼠和大鼠達850萬只。其中以兔子眼睛作為藥品和化妝品檢測的樣本，利用德萊茲法觀察角膜和結膜的變化檢測毒性·刺激性的實驗，是非常殘忍的。

　　因此，開發了在in vitro條件下的動物實驗代替傳統動物實驗。此方法可檢測培養細胞的毒性和細胞增值能力，不僅可測定因試劑破壞細胞而流出的酶量，還可以使色素滲入到活細胞中。比實驗動物法實惠且節省操作，可客觀地測定其毒性。

　　本產品是使用培養細胞對各種試劑的毒性進行簡便測定的試劑盒。

　　可以直接測定細胞膜受到試劑影響而死亡的細胞中的游離LDH（乳酸脫氫酶），靈敏性高。

◆優點

●　可用于吸附細胞·浮游細胞

●　使用酶測定法進行測定，可以對細胞毒性進行精確的定量測定

●　通過調節樣品處理時間和顯色反應時間可以調節靈敏度

●　使用吸光全自動定量繪圖酶標儀可以對多數樣品進行測定

●　測定波長：吸光560 nm

◆測定原理

　　在LDH的作用下乳酸會被丙酮酸氧化，而輔酶會被NADH還原。樣品中根據LDH活性按比例生成的NADH會在心肌黃酶的作用下會將硝基藍四氮唑還原，生成藍紫色的雙蟻酯。在560 nm（±10 nm）下測定這個顯色液的吸光度。

◆試劑盒構成

顯色試劑 硝基藍四氮唑還原

心肌黃酶，NAD（3.7mg/vial）——————————————5 mL用×10支

緩沖液 DL-乳酸鋰（50mg/mL）——————————————————55 mL×11支

反應停止液 鹽酸（1mol/L）————————————————————55 mL×11支

96孔微量滴定板—————————————————————————10塊（未滅菌）

◆使用方法

實驗步驟

96孔板（滅菌）

↓→添加細胞。37℃下過夜

↓→PBS清洗

↓→添加檢測物。37℃，15分鐘

↓→離心分離

上清液

◆用途

　　通過LDH法檢測各種試劑毒性的試劑盒。