簡要描述：以外泌體為代表的細胞外囊泡(EV: Extracellular Vesicles)是由細胞釋放的脂質雙分子層微囊泡，內含核酸、蛋白和脂質等。作為生物體內細胞間的通信媒介，外泌體相關的研究成為免疫、癌癥、神經和代謝等多個領域的研究熱點。
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| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
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以外泌體為代表的細胞外囊泡(EV: Extracellular Vesicles)是由細胞釋放的脂質雙分子層微囊泡，內含核酸、蛋白和脂質等。作為生物體內細胞間的通信媒介，外泌體相關的研究成為免疫、癌癥、神經和代謝等多個領域的研究熱點。
EV的應用領域廣泛，有望應用于治療藥物、生物標志物和藥物遞送系統 (DDS)。尤其是間充質干細胞(MSC: Mesenchymal stem cell)分泌的EV具有抗炎、抗纖維化和組織修復等作用1），除醫療領域外，在化妝品和食品等領域也備受關注。
EV的實際應用需要能夠高效且大規模分離和純化高純度EV的技術。富士膠片和光采用與金澤大學醫學系免疫學的華山教授共同開發的分離和純化技術“PS親和法"2），開發了用于大規模純化EV的MassivEV™ EV Purification Column PS（MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化分離柱 PS）。配合使用專用的緩沖液MassivEV™ Purification Buffer Set（MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化緩沖液套裝），可從支持規模放大的細胞培養上清中簡易分離和純化EV。
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MassivEV™ EV Purification Column PS | MassivEV™ Purification Buffer Set |
◆產品概要
MassivEV™ EV Purification Column PS和MassivEV™ Purification Buffer Set是用于從大規格細胞培養上清中分離和純化外泌體等細胞外囊泡（EV）的分離柱和專用緩沖液。采用與EV膜表面的磷酯酰si氨酸（PS）鈣離子依賴性結合Tim4的“PS親和法"*，可簡易純化高純度EV。
*利用與EV膜成分的磷酯酰si氨酸（PS）特異性結合Tim4（(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4)）的純化方法。即利用與PS鈣離子依賴性結合Tim4的性質，在鈣離子存在下，固定在載體上的Tim4可捕獲樣品中的EV。通過清洗去除雜質后，加入EV Elution Buffer（螯合劑），低損傷狀態下從載體上的Tim4的洗脫和純化EV的方法。
◆特點
● 可從大規格（10 mL至公升級別規格）細胞培養上清中高效分離和純化高純度EV
● 無需切向流過濾（TFF）系統等昂貴設備 ※只需一個蠕動泵
表1 從200 mL間充質干細胞培養上清中分離和純化EV的對比（富士膠片和光評估）
MassivEV™ | TFF+ AEX※ | TFF+SEC※ | |
可純化的EV | PS陽性EV | 取決于樣品 | 取決于樣品 |
純度 | 高 | 低 | 低 |
純化步驟數 | 1 個步驟 - PS 親和法 | 2 個步驟 - TFF 系統 - 陰離子交換色譜法 | 2 個步驟 - TFF 系統 - 尺寸排阻色譜法 |
EV粒子產量（參考值） | 1.7x1011 particles | 1.1x1011 particles | 0.7x1011 particles |
純化所需時間 | 8 h | 10 h | 10 h |
※AEX: 陰離子交換色譜法; SEC:尺寸排阻色譜法
<參考> 一只小鼠的EV建議給藥量3-5）：1.0×109 particles/mouse
◆適應性
細胞培養上清（MSC等）：10 mL至公升級別規格
※ 從10 mL以下的細胞培養上清中分離EV時，請使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（產品編號：290-84103）
◆處理樣品量
1 mL (產品編號：131-19491) | 5 mL (產品編號：137-19493) | |
樣品量※1 | 200 mL | 1 L |
動態結合能力※2 | 5×1011 particles/mL 樹脂 | 2.5×1012 particles/5 mL樹脂 |
※1 MSC細胞培養上清中一次純化可處理的大概樣品量。樣品處理量因細胞培養上清中所含的EV粒子數而異。處理同一樣品時，可重復使用分離柱，已確認最多可使用五次（初次使用1次、重復使用4次）。
※2 使用MSC來源EV的研究結果。可能因細胞種類等條件而異。
◆原理
PS親和法利用與EV膜表面的磷酯酰si氨酸（PS）特異性結合的Tim4，是富士膠片和光開發的EV分離方法。
PS-Tim4結合的高特異性配合螯合劑的溫和洗脫，可使EV在完整狀態下高純度分離。
結合
| 洗脫
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圖1 MassivEV™ EV Purification Column PS（PS親和法）分離和純化細胞外囊泡的原理 | |
◆實驗方案
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◆數據
性能數據
與傳統方法對比
在增殖培養基（MSCulture™/ 10% FBS)及EV生產培養基（EV-Up™）中培養骨髓來源的MSC，回收細胞培養上清后，使用0.22 μm過濾器過濾。取200 mL經過濾處理的細胞培養上清用作樣品，采用以下4種方法進行分離和純化。純化后的EV溶液分別使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)和ELISA進行分析。
<分離方法>
MassivEV™ MassivEV™ EV Purification Column PS / MassivEV™ Purification Buffer Set (本產品, PS親和法)
TFF 僅切向流過濾（500 kDa）
TFF+AEX 切向流過濾（500 kDa）＋陰離子交換色譜法
TFF+SEC 切向流過濾（500 kDa）＋尺寸排阻色譜法
（1）使用NTA 進行粒子分析
MassivEV™
| TFF
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Size Distribution：Mean: 167.5± 0.9 nm Size Distribution：Mode: 150.1 ± 10.8 nm Size Distribution：SD: 43.9 ± 1.2 nm Total Concentration：8.08×1010 ± 2.74×109 particles/mL Total Concentration：29.4 ± 1.0 particles/frame Total Concentration：32.4 ± 1.1 centres/frame | Size Distribution：Mean: 163.6± 2.8 nm Size Distribution：Mode: 128.3 ± 4.2 nm Size Distribution：SD: 63.3 ± 3.3 nm Total Concentration：2.21×1010 ± 1.53×109 particles/mL |
TFF+AEX
| TFF+SEC
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Size Distribution：Mean: 125.7± 2.4 nm Size Distribution：Mode: 92.8 ± 3.2 nm Size Distribution：SD: 55.9 ± 3.3 nm Total Concentration：9.19×109 ± 1.96×108 particles/m | Size Distribution：Mean: 163.9± 6.4 nm Size Distribution：Mode: 154.1 ± 6.0 nm Size Distribution：SD: 60.4 ± 1.0 nm Total Concentration：1.86×1010 ± 1.19×109 particles/mL |
【結果】
與TFF相比，MassivEV™ 純化得到的粒子數量少，但與 TFF+AEX 或 TFF+SEC 相比，MassivEV™ 純化得到的粒子數量更多
（2）使用CD63 ELISA和CD81 ELISA的EV回收率比較（n=3）
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【結果】
相比傳統方法，使用MassivEV™ 的EV回收率更高。
（3）顆粒蛋白比
蛋白質與顆粒的比例可用于指示 EV的純度 6）。收集的EV溶液中總蛋白含量可以用BCA方法測定，顆粒數可以用NTA測定。然后，比較每 1 μg 蛋白質所含有的顆粒數。
【結果】
MassivEV方法獲得的每 1 μg 蛋白質所含有的顆粒數是高于傳統方法，也就說明MassivEV方法可以回收純度更高的外泌體。
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| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 131-19491 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化分離柱 PS | 1 mL | 基因研究用 | - |
| 137-19493 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化分離柱 PS | 5 mL | 基因研究用 | - |
| 295-96601 | MassivEV™ Purification Buffer Set MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化緩沖液套裝 | 1 mL×10次用 (5 mL×2次用) | 基因研究用 | - |
| 以上MassivEV™ EV Purification Column PS、MassivEV™ Purification Buffer Set請配合一同使用 |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 132-19345 | MSCulture™ High Growth Basal Medium MSCulture™ High Growth基礎培養基 | 500 mL | 細胞培養用 | - |
| 133-19331 | MSCulture™ High Growth Supplement MSCulture™ High Growth添加劑 | 5 mL | 細胞培養用 | - |
| 以上MSCulture™ High Growth基礎培養基、MSCulture™ High Growth添加劑請配合一同使用 |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 053-09451 | EV-Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF EV-Up™ 間充質干細胞外泌體生產用基礎培養基，無動物源成分 | 95 mL | 細胞培養用 | - |
| 298-84001 | EV-Up™ MSC EV Production Supplement, AF EV-Up™ 間充質干細胞外泌體生產用添加劑，無動物源成分 | 100 mL用 | 細胞培養用 | - |
| 以上EV-Up™基礎培養基、EV-Up™添加劑請配合一同使用 |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™外泌體提取試劑盒PS Ver.2 | 2 tests | 基因研究用 | - |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS Ver.2 | 10 tests | 基因研究用 | - |
| 適用于從10 mL以下的細胞培養上清和體液樣品中分離和純化EV |
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